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单抗制备、血细胞纯化、细胞器分离的离心,你做对了吗?

点击次数:50 发布时间:2018-11-29

通用离心机在各行业应用得非常广泛。目前在科研单位应用比较多的离心机产品有高速离心机、血液离心机、细胞离心机等,种类繁多,功能也不尽相同。不同试验需要不同的离心条件,经常需要对细胞悬液离心,以增加细胞浓度或洗除有关试剂,可调节的台式离心机就能满足大多试验的需求,那么本文简单介绍一下在单抗制备、血细胞纯化、细胞器分离这3个试验中如何合理的使用离心机。

单抗制备

单克隆抗体技术一种免疫学技术,将产生抗体的单个B淋巴细胞同骨髓肿瘤细胞杂交,获得既能产生抗体,又能无限增殖的杂交细胞,并以此生产抗体。此技术广泛应用于疾病诊断、治疗及多个行业的测试诊断。抗体制备的每个步骤都需要使用到离心机,合理的离心条件是获取单克隆单体的有效保障。

 

 1、免疫原可以有多种:细胞、细胞提取物、纯化蛋白、融合蛋白、多肽、糖类、脂类或DNA等。细胞作为免疫原时转速应为600 rpm/min~1000 rpm/min,室温离心5 min~10 min,转速过低会导致细胞沉降过少,转速过高会引起细胞破碎。纯化蛋白、融合蛋白作为免疫原时转速应为10000 rpm/min~15000 rpm/min,4℃离心20~45 min。

  2、细胞融合、细胞筛选及细胞冻存的过程中,转速600 rpm/min~1000 rpm/min,室温离心5 min~10 min即可。

血细胞纯化

血细胞由多种类型的细胞悬液组成,每种细胞都有它们自身的特性和功能并广泛被用于医学临床和诊断。多年来研究人员对血细胞分离纯化作了大量工作,实验室研究和血液成分分离都已广泛使用各种离心设备。下面我们将以实验室研究为主线,举例说明各种血细胞分离离心条件:

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1、单核(白)细胞的纯化需要1800 rpm/min ~3000 rpm/min,20℃离心15 min~20 min(不要在0~5℃低温离心,否则分离效果将很差)。在洗涤的过程中可以使用1000 rpm/min ~1300 rpm/min,20℃ 离心5 min。

2、人血中分离红细胞,单核(白)细胞,中性(白)细胞需要1500 rpm/min~1600 rpm/min,18℃~23℃ 离心35 min,离心过程中温度过高、离心力过大或离心时间过长都可能使中性(白)细胞沉淀。

细胞器分离

细胞器分离是研究如细胞核、线粒体、高尔基体、溶酶体和微体,以及各种大分子基本手段。通常会使用各种物理方法如研磨、超声破碎、低渗将组织制成均浆,然后利用差速离心和密度梯度离心来获取细胞器,那下面我们来简单的了解一下不同细胞器的离心条件:

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